ClickCease
+ 1-915-850-0900 spinedoctors@gmail.com
דף בחר

מחלות נוירודגנרטיביות, כגון מחלת אלצהיימר ומחלת פרקינסון, משפיעות על מיליוני אנשים ברחבי העולם. מגוון רחב של אפשרויות טיפול זמינים לטיפול בסימפטומים של מספר מחלות נוירודגנרטיבי למרות התוצאות מוגבלות לעתים קרובות. מחקרים מצאו כי מתח חמצוני הנגרם על ידי גורמים פנימיים וחיצוניים כאחד יכול להיות סיבה להתפתחות של מחלות נוירודגנרטיב. ה גורם תעתיק, Nrf2, נקבעה לתפקד כמנגנון הגנה מרכזי נגד לחץ חמצוני. מטרת המאמר להלן היא להראות את ההשפעות של Nrf2 על מחלות נוירודגנרטיביות.

תוכן

אפנון Proteostasis על ידי גורם שעתוק NRF2

מחלות נוירודגנרטיביות קשורות להצטברות של אגרגטי חלבון ספציפיים, דבר המצביע על קשר אינטימי בין המוח הפגוע לבין אובדן הפרוטאוזאזיס. פרוטאוסטזיס מתייחס לכל התהליכים שבאמצעותם תאים לשלוט על שפע וקיפול של תודה proteome לרשת רחבה המשלבת את הרגולציה של נתיבי איתות, ביטוי גנים ומערכות חלבון השפלה. סקירה זו מנסה לסכם את הממצאים הרלוונטיים ביותר על אפנון תעתיק של proteostasis המופעל על ידי גורם שעתוק NRF2 (גורם גרעיני (נגזר erythroid 2) - כמו 2). NRF2 נחשב באופן קלאסי כווסת הראשי של התגובה התא נוגד חמצון, אם כי הוא מתגלה כיום כמרכיב מפתח של מכונות התמרה לשמור על פרוטאוזאזיס. כפי שנדון, NRF2 יכול להיות חזה כרכזת הידור אותות חירום שמקורם הצטברות חלבון misfolded על מנת לבנות תגובה תעתיק מתואמת perdurable. זו מושגת על ידי פונקציות של NRF2 הקשורים לשליטה של ​​גנים המעורבים תחזוקה של הפיזיולוגיה reticulum endoplasmic, proteasome ו autophagy.

מילות מפתח: מחלות נוירודגנרטיביות, תגובת חלבון שהתגלתה, פרוטאזום, יוביקוויטין, אוטופאגי, מתח חמצוני

קיצורים

Sciencedirect.com/science/article/pii/S2213231716304050

מבוא

גורם גרעיני (erythroid- נגזר 2) - כמו 2 (NRF2) הוא חלבון בסיסי- leucine-zipper נחשב כיום כווסת הורים של הומאוסטזיס הסלולר. הוא שולט על הביטוי הבסיסי והמתח של גנים של 250 שמשתפים במשותף משפר של cis-action שמגדיר את אלמנט התגובה נוגדי החמצון (ARE) [1], [2], [3], [4], [5]. גנים אלה משתתפים בתהליכי טיהור שלב I, II ו- III, גלוטתיון וחילוף חומרים peroxiredoxin / thioredoxin, ייצור NADPH דרך מסלול פוספט pentose ואנזים malic, חמצון חומצות שומן, מטבוליזם של ברזל ו- proteostasis [6]. בהתחשב בפונקציות cytoprotective רחב, זה אפשרי כי פגיעה פרמקולוגית אחת NRF2 עשוי למתן את ההשפעה של האשמים העיקריים של מחלות כרוניות, כולל מתח חמצוני, דלקתי ו proteotoxic. תפקידו של NRF2 ב אפנון ההגנה נוגדי חמצון ברזולוציה של דלקת טופלו במחקרים רבים (נבדק ב [7]). כאן, נתמקד בתפקידה בפרוטאוזאזיס, כלומר, השליטה ההומיאוסטית של סינתזת החלבון, קיפול, סחר והשפלה. דוגמאות יינתנו בהקשר של מחלות נוירודגנרטיביות.

אובדן פרוטאוסטזיס משפיע על פעילות NRF2 במחלות ניווניות

סימן ההיכר הכללי של מחלות ניווניות הוא התרחשות של צבירה חריגה של כמה חלבונים. לפיכך, אגרגטים של חלבונים מקופלים בצורה שגויה של? -סינוקליין (? -SYN) נמצאים במחלת פרקינסון (PD), פלאמי עמילואיד (A?) ובסבכים נוירו-פיברילריים TAU היפר-פוספוריליים במחלת אלצהיימר (AD), ציד (Htt) ב מחלת הנטינגטון (HD), סופרוקסיד דיסמוטאז 1 (SOD1) וחלבון TAR DNA מחייב 43 (TDP-43) בטרשת לרוחב amyotrophic (ALS), חלבון פריון (PrP) באנצפלופתיה ספוגיפורמית וכו '. אגרגטים לחלבון יכולים להשפיע על מספר מסלולים תאיים, אשר בתורם עשויים להשפיע על רמות NRF2 ופעילותם.

שכבות שונות של רגולציה הדוקה שליטה NRF2 פעילות

בתנאים פיזיולוגיים, התאים מפגינים רמות נמוכות של חלבון NRF2 בשל המחזור המהיר. בתגובה לגירויים שונים, NRF2 חלבון הוא צבר, נכנס לגרעין ומגביר את שעתוק של ARE המכילים גנים. לכן, ניהול של רמות חלבון NRF2 היא נקודת מפתח כי צריך לשלב אותות קלט חיוביים ושליליים. כפי שנדון עוד, NRF2 מופעל על ידי מנגנונים חופפים שונים כדי לתזמר תגובה מהירה ויעילה, אבל מצד שני, NRF2 יכול להיות מעוכב, כנראה בשלב השני, כדי לכבות את התגובה שלו.

מנקודת מבט קלאסית, הפעלת NRF2 נחשבה כתוצאה מהתגובה התאית לתרכובות חמצון או אלקטרופיליות. בהקשר זה, מתאם הליגאז של E-ubicitin E3, כמו חלבון 1 הקשור ל- ECH (KEAP1), ממלא תפקיד מכריע. פרטים מולקולריים יטופלו עוד בסעיף 4.1. בקצרה, KEAP1 משמש כחיישן חמצון עקב שאריות ציסטאין קריטיות המובילות לכל מקום בכל מקום ב- NRF2 והשפלה פרוטאזומלית. בנוסף לאופנון הקלאסי הזה, NRF2 מוסדר עמוקות על ידי איתות לאירועים. ואכן, הוכח כי קינאזות שונות זרחן ומווסתות את NRF2. לדוגמא, ניתן להזליף NRF2 על ידי קינאזות חלבון המופעלות על ידי מיטוגן (MAPK), אם כי תרומתו לפעילות NRF2 נותרה לא ברורה [8], [9], [10], [11]. PKA קינאז כמו גם כמה איזואימי PKC [12], CK2 [13] או Fyn [14] זרחן NRF2 המשנים את יציבותו. עבודה קודמת מקבוצתנו דיווחה כי גליקוגן סינטאז קינזה -3? (GSK-3?) מעכב את NRF2 על ידי הרחקה גרעינית והשפלה פרוטאזומלית [15], [25], [26], [27], [28], [29], [30]. הפרטים המולקולריים נדונו בסעיף 4.1. יתר על כן, NRF2 מוגש לסוגים אחרים של רגולציה. לדוגמא, אצטילציה של NRF2 על ידי CBP / p300 מגבירה את פעילותה [17], בעוד שהיא מעוכבת על ידי miR153, miR27a, miR142-5p ו- miR144 [16], או על ידי מתילציה של איי ציטוזין-גואנין (CG) בתוך היזם NRF2 [18].

השפעת מצרפי חלבון על מנגנוני NRF2 רגולטוריים

בפרק זה נתמקד איך הצטברות של חלבון misfolded יכול להשפיע על פעילות NRF2 לספק כמה מסלולים שהוזכרו לעיל כדוגמה ממחישה. ראשית, עלינו לשקול כי הצטברות חלבון כבר מקושר היטב עם נזק חמצוני. ואכן, הצטברות חלבון שגוי ו צבירה לגרום ייצור חריגה של מינים חמצן תגובתי (ROS) מ המיטוכונדריה ומקורות אחרים [19]. כפי שצוין לעיל, ROS ישנה ציסטאין רגישים-רגישים של KEAP1 המוביל לשחרור, ייצוב לוקליזציה הגרעין של NRF2.

באשר לפרוטאופתיה, דוגמה לאירועי איתות לא מוסדרים שעשויים להשפיע על NRF2 ניתנת על ידי הפעלת יתר של GSK-3? במודעה. GSK-3?, הידוע גם בשם TAU kinase, משתתף בזירחון של חלבון זה הקשור למיקרו-צינור, וכתוצאה מכך צבירתו, היווצרות סבכים נוירו-פיברריים והפרעה של הובלה אקסונלית (נסקרה ב [20]). מצד שני, GSK-3? מפחית באופן דרמטי את רמות ה- NRF2 ואת הפעילות כאמור לעיל. אף על פי שאינה מקובלת, מפל העמילואידים מציע כי A רעיל? אוליגומרים מגדילים את GSK-3? פעילות יחד עם היפר זרחון TAU ומוות נוירונים [21], [22]. ישנם מודלים שונים להסביר כיצד A? מעדיף GSK3-? פעילות. למשל, א? נקשר לקולטן האינסולין ומעכב את מסלולי איתות PI3K ו- AKT, שהם חיוניים לשמירה על GSK-3? הושבת על ידי זרחון בשאריות ה- Ser9 המסוף N שלו [23]. מצד שני, A חוץ תאי? מקיים אינטראקציה עם קולטנים מקורזללים, חוסם איתות WNT [24] ושוב וגורם לשחרור GSK-3 פעיל. לסיכום, א? הצטברות מובילה להפעלת יתר חריגה של GSK-3? ובכך פוגעת בתגובת NRF2 מתאימה.

כפי שפורט בסעיף הבא, חלבונים שגוי להוביל הפעלה של PERK ו MAPKs, אשר בתורו up- להסדיר NRF2 [31], [8], [9], [10], [11]. יתר על כן, dysregulated פעילות CBP / p300 דווחה במספר חלבונים [32] וכן ירידה עולמית במתילציה של דנ"א במוח AD הוצגה גם [33], ולכן מספק סיבות לחקור את הרלוונטיות של הממצאים הללו בתקנה NRF2.

אנו ואחרים ראינו בנקרוסים של חולי PD ו- AD עלייה ברמות החלבון של NRF2 וחלק מהמטרות שלו, כגון heme oxygenase 1 (HMOX1), NADPH quinone oxidase 1 (NQO1), p62 וכו ', הן על ידי immunoblot והן [34], [35], [36], [37], [38], [39]. תקנה של NRF2 במחלות אלה מתפרשת כניסיון לא מוצלח של המוח החולה לשחזר ערכים הומיאוסטטיים. עם זאת, מחקר אחר הראה כי NRF2 הוא מקומי בעיקר בציטופלסמה של נוירונים בהיפוקמפוס AD, דבר המצביע על הפחתת פעילות תעתיק NRF2 במוח [40]. סביר להניח כי הפער של תצפיות אלה קשורה לשינויים הגורמים השולטים NRF2 לאורך השלבים המתקדמים של neurodegeneration.

שלוש מערכות עיקריות תורמות לפרוטאוסטאזיס, דהיינו תגובת החלבון (UPR), מערכת הפרוטאזומה של יוביקוויטין (UPS) ואוטופאגי. הבא, אנו מציגים ראיות לחזות NRF2 כרכזת חיבור אותות חירום מופעל על ידי אגרגטים חלבון עם מכונות נגזרות חלבון.

NRF2 משתתפת בתגובת החלבון (UPR)

NRF2 הפעלה בתגובה UPR

קיפול חלבון חמצוני ב- ER מונע על ידי מספר מסלולים מובחנים, שהשימור בהם כולל את החלבון דיסולפיד-איזומרז (PDI) ואת הסולפידריל אוקסידאז האנדופלזמית אוקסידורדוקטין 1 (ERO1? ו- ERO1? אצל יונקים) כתורם דו-סולפיד. בקצרה, PDI מזרז היווצרות ושבירה של קשרי דיסולפיד בין שאריות ציסטאין בתוך החלבונים, כשהם מתקפלים, עקב הפחתה וחמצון של חומצות האמינו של ציסטאין משלה. מחזור ה- PDI ממוחזר על ידי פעולתו של אנזים ניקיון הבית ERO1, המחדיר מחדש קשרי דיסולפיד ל- PDI [41]. חמצן מולקולרי הוא מקבל האלקטרונים הסופי של ERO1, המייצר כמויות סטויוכיומטריות של מי חמצן עבור כל קשר דו-סולפיד המיוצר [42]. פרוקסידאזים (PRX4) ופרוטוקסידאזים של גלוטתיון (GPX7 ו- GPX8) הם אנזימים מרכזיים להפחתת מי חמצן במיון. כאשר מערכת זו המפחיתה את האוקסידו אינה פועלת כראוי, מתרחשת הצטברות חריגה של חלבונים מקופלים בצורה לא נכונה ומערך האותות בשם תגובת החלבון הנפרש (UPR) מועבר לציטופלזמה ולגרעין בכדי להקים מחדש את ההומאוסטזיס של ה- ER [43]. שלושה חלבונים הקשורים לקרום זוהו לחישת מתח ER באיקריוטים: הפעלת גורם שעתוק 6 (ATF6), ER eIF2 בלבלב? קינאז (PERK, גם חלבון כפול גדיל המופעל על ידי חלבון קינאז כמו קינאז ER), וקינאז 1 הדורש אינוזיטול (IRE1). התחום הלומינלי של כל חיישן קשור למלווה של 78 kDa המכונה חלבון מוסדר גלוקוז (GRP78 / BIP). BIP מתנתק ממתח ER כדי לקשור חלבונים פרושים, מה שמוביל להפעלת שלושת החיישנים [44].

NRF2 והומולוג שלו NRF1, הקשורים גם בתגובה נוגדי חמצון, להשתתף התמרה של UPR לגרעין. במקרה של NRF1, חלבון זה ממוקם בקרום ER ועובר טרנסלוקציה גרעינית על deglycosylation או מחשוף. לאחר מכן, הפעלה UPR מוביל לעיבוד של NRF1 ו הצטברות הגרעין של שבר שהתקבל בתא הגרעיני. עם זאת, היכולת להעביר את ARE המכילים את הגנים של קטע NRF1 זה עדיין תחת דיון [45].

Glover-Cutter ועמיתים לעבודה הראו הפעלה של אורתולוגיית NRF2 של C. elegans, SKN-1, עם מדחיפי ER שונים. ביטוי מוגבר של SKN-1 היה תלוי במתווכים שונים של UPR, כולל IRE1 או PERK תולעת [46]. ב PERK תאים לקוי, סינתזה חלבונים לקוי מוביל הצטברות של חמצן אנדוגני אפופטוזיס הבאים [47]. המפעיל המשמש את PERK להגנה על ה- ER מפרוקסידים אלה עשוי להיות NRF2, שכן הוא כבר דיווח כי PERK phosphorylates NRF2 ב Ser40, ובכך למנוע השפלה שלה על ידי KEAP1 [31]. אינדוקציה של ASK1 הוא גם עשוי לשחק תפקיד במסלול זה דרך הפעולה kinase TRF2 בתיווך של IRE1 [48]. למרות התפקיד של MAPKs בוויסות של NRF2 עדיין שנוי במחלוקת, הוצע לאחרונה כי מסלול IRE1-TRAF2-ASK1-JNK עשוי להפעיל NRF2 [49] (איור 1). מעניין, ב C. elegans ותאי אדם, ראיות חדשות עולה כי cystenylation cystenylation של IRE1 קינאז ב לולאה ההפעלה שלה מעכב IRE1 בתיווך UPR ויזם תגובה נוגדי חמצון p38 מונע על ידי NRF2. הנתונים מראים כי IRE1 יש פונקציה עתיקה כמו זקיף cytoplasmic המפעילה p38 ו NRF2 [50].

איור 1 תקנה של NRF2 על ידי UPR. הצטברות של חלבונים נפרשים או שגוי בתוך reticulum endoplasmic יכול ליזום את התגובה חלבון נפרש (UPR). ראשית, BIP המלווה הוא שוחרר מן התחום intraluminal של חיישנים ER IRE1 ו PERK לקשור נפרש / חלבונים misfolded. זה מאפשר dimerization ו trans-auto זרחון של תחומים cytosolic שלהם. תוצאות PERK מפעילות זרחן ישיר ב- NRF2 ב- Ser40, מה שמוביל ל NRF2 טרנסלוקציה לגרעין ולהפעלת גני מטרה. ההפעלה IRE1 גורם לגייס של TRAF2 ואחריו ASK1 ו זרחון JNK והפעלה. כפי JNK כבר דיווחו phosphorylate ולהפעיל NRF2, סביר לחשוב כי הפעלה IRE1 יוביל להגברת הפעילות NRF2.

מחקרים רבים על אינדוקציה של ה- UPR נערכו עם מעכב טוניקמיצין חלבון גליקוזילציה. נראה כי NRF2 חיוני למניעת מוות של תאים אפופטוטיים המושרה על ידי טוניקמיצין [31] והפעלתו בתנאים אלה מונעת על ידי השפלה אוטופגית של KEAP1 [51]. בהתאם, השתקה בתיווך shRNA של ביטוי NRF2 בתאי? TC-6, קו אינסולינומה עכברי? תאי, הגדילה משמעותית ציטוטוקסיות המושרה על ידי טוניקמיצין והביאה לעלייה בביטוי של סמן הלחץ החזותי פרו-אפופטוטי CHOP10. מאידך, הפעלת NRF2 על ידי 1,2-דיתיול-3-תיון (D3T) הפחיתה את הציטוטוקסיות של טוניקמיצין והחלישה את הביטוי של CHOP10 ו- PERK [52]. מעניין שנוירוני הריח שהוגשו ליישום מערכתי של טוניקמיצין הגבירו את ה- NRF2 במקביל לחברי UPR אחרים כגון CHOP, BIP, XBP1 [53]. תוצאות אלו הורחבו למחקרי in vivo, שכן עירוי חדרית של טוניקמיצין בחולדות גרם לביטוי של PERK ו- NRF2 בהיפוקמפוס מלווה בגירעונות קוגניטיביים משמעותיים, הגברת זרחון TAU והפקדות A? 42 [54].

NRF2 עד רגולציה מפתח גנים לתחזוקת הפיזיולוגיה של ER

לומן ה- ER זקוק לאספקה ​​בשפע של GSH מהציטוזול על מנת לשמור על הכימיה של דיסולפיד. NRF2 מווסת אנזימים מכריעים של חילוף החומרים של GSH במוח, כגון הובלת ציסטין / גלוטמט,? -גלוטמט ציסטאין סינטטאז (? -GS), גלוטמט-ציסטאין ליגאז קטליטי ותת יחידות (GCLC ו- GCLM), רדוקטאז גלוטתיון (GR) ו- גלוטתיון פרוקסידאז (GPX) (נבדק ב- [55]). הרלוונטיות של NRF2 לשמירה על GSH ב- ER נתמכת בממצא כי הפעלה פרמקולוגית או גנטית של NRF2 מביאה להגברת סינתזת GSH באמצעות GCLC / GCLM, תוך עיכוב של ביטוי האנזימים הללו על ידי מציאת NRF2 גרמה להצטברות של פגומים. חלבונים בתוך ה- ER המובילים להפעלת UPR [56].

ב- C. elegans כמה רכיבים של גני היעד UPR המווסתים על ידי SKN-1, כולל Ire1, Xbp1 ו- Atf6. אף על פי ש- NRF2 מווסת את הביטוי של כמה גנים של פרוקסידאז (PRX) וגלוטתיון פרוקסידאז (GPX) אצל יונקים (נבדק ב- [57]), רק GPX8 הוא אנזים ממוקד ER טוב, המאכלס את אות החזרת KDEL [58]. אובדן GPX8 גורם להפעלת UPR, לדליפה של מי חמצן שמקורם ב- ERO1? לציטוזול ולמוות תאים. מי חמצן שמקורם ב- ERO1? הפעילות אינה יכולה להתפזר מ- ER לציטוזול עקב הפעולה המתואמת של GPX8 ו- PRX4 [59]. בהקשר זה, ניתוח של מערך הביטוי הגנטי נוגדי חמצון-ביטוי גנים תוך שימוש ב- RNA מרקמות עכברים מסוג wild ו- NRF2-null, גילה כי הביטוי של GPX8 היה מוסדר למטה בהיעדר NRF2 [60]. בהתאם לכך, ניתוח תעתיק מדגימות מטופלים הסובלות ממיאופלזמות מיאלופרופירטיביות, פוליציטמיה או מיאלופיברוזיס, מחלות קשורות גם למתח חמצוני ודלקת כרונית בדרגה נמוכה, מראות רמות ביטוי נמוכות יותר של NRF2 והן של GPX8 בהשוואה לנבדקי ביקורת [61]. עדיין אין מחקרים הכוללים GPX8 באופן ספציפי בהגנה על המוח האנושי אך ניתוח תעתיק בעכברים מצביע על עלייה מפצה של GPX8 בתגובה לרעלן הפרקינסוני MPTP [62].

השפעת NRF2 על Dysregulation UPR במחלות ניווניות (Neurodegenerative Diseases)

תקלה באנזימים PDI ובפעילות כרונית של ה- UPR עשויה ליזום או להאיץ את ההתפתחות הנוירו-התפתחותית. נוירונים מושפעים ממחלות, מודלים של בעלי חיים למחלות נוירודגנרטיביות, כמו גם רקמות אנושיות שלאחר המוות, העידו על רגולציה של מספר סמני UPR ברוב הפרעות אלו. שינוי של PDI / UPR מסלול במחלות ניווניות נבדק יפה ב [63] אבל את הנקודות הבאות מדגימות המוח שלאחר המוות יש לשקול. רמות PDI מוגברות נוירונים נושאי סבך ובגופים Lewy של AD וחולים PD, בהתאמה [64], [65]. PDI ו- ERP57 מוסדרים למעלה ב- CSF מחולי ALS ובמוחות ממקרי CJD [66], [67], [68]. BIP, PERK, IRE1 ו- ATF6 מוגברות בדגימות מחולים עם AD, PD או ALS [69], [70], [71], [67]. BIP, CHOP ו XBP1 מוגבהים בדגימות מוח לאחר המוות מ HD [72], [73]. יתר על כן, למעלה רגולציה של ERP57, GRP94 ו- BIP נמצא ברקמות קליפת המוח מחולי CJD [74]. בסך הכל, עדות זו מגלה כי הצטברות של חלבונים misfolded ב parenchyma במוח מוביל הפעלה מזיקה כרונית של UPR. מעניין, יש לאחרונה מחקר המקשר הפעלה של NRF2 ידי PERK בתחילת לספירה. במחקר זה, החוקרים ניתחו האם שינויים מתחיים חמצוניים משתנים ב- NRF2 ו- UPR עשויים להוות אירועים מוקדמים ב- AD פתוגנזה באמצעות תאי דם היקפיים אנושיים ומודל עכבר מהונדס AD בשלבי מחלה שונים. מתח מוגבר חמצון מוגברת pSer40-NRF2 נצפו בתאי אדם monopuclear הדם ההיקפיים מבודד אנשים עם ליקוי קוגניטיבי קל. יתר על כן, הם דיווחו על לקוי של סידן הומוסקסואליות של סידן ER וסמלים של לחץ מסוג ER במחלות אלו מאנשים עם פגיעה קוגניטיבית קלה ו- AD [75].

הרגולציה ההדדית של NRF2 ושל פרוביזום Ubiquitin S (UPS)

UPS מודולציה NRF2 רמות חלבון

ה- UPS משתתף בהידרדרות של חלבונים פגומים או מטופלים ושולט על רמות המולקולות הרגולטוריות העיקריות בציטוזול ובגרעין. הליבה המרכזית של מערכת זו היא אנזים multisubunit גדול המכיל קומפלקס פעיל proteolytic בשם 20S. פרוטאזום הליבה של 20S מבזה חלבונים שהתפתחו, אך מחייב למרכיבי חלבון רגולטוריים שונים משנה את סגוליות המצע ואת פעילותו. לדוגמה, תוספת של אחת או שתיים יחידות משנה רגולטוריות של 19S לליבת 20S מהווה את הפרוטאזום 26S ומשנה את הייחודיות שלו כלפי חלבונים מקופלים ילידים [76], [77]. השפלה פרוטאזומלית צריך מחייב קוולנטי של יוביקוויטין. הצמדה של יוביקוויטין מתקדמת באמצעות מנגנון של שלושה צעדים מפל. ראשית, האובייקט המפעיל את היוביקובין E1 מפעיל את היוביקטינים בתגובת ה- ATP. לאחר מכן, אנזים E2 אחד (חלבון יוביקטינים או יוביקטינים-אנלוגי) מעביר את היוביקטינים המופעלים מ- E1 אל המצע המחובר באופן ספציפי לחולה של משפחת ליגאז 'של יוביקוויטין-חלבון, הנקראת E3. למרות הגורל המדויק של חלבון מיובש יהיה תלוי בטבע של שרשרת יוביקוויטין, תהליך זה בדרך כלל התוצאות השפלה על ידי xNUMXS 26S [78].

E3-ligase KEAP1 הוא המעכב הידוע ביותר של NRF2. מנגנון של רגולציה KEAP1 מסביר באלגנטיות כיצד רמות NRF2 להסתגל תנודות חמצון. בתנאים הבסיסיים, NRF2 מסונתז החדש נלכד על ידי ההומודימר KEAP1, המחבר מולקולה אחת של NRF2 בשני רצפי חומצות אמינו עם זיקה נמוכה (אספרטט, לאוצין, גליצין, DLG) וגבינה גבוהה (גלוטמט, threonine, גליצין, גלוטמט, ETGE). האינטראקציה עם עזרים KEAP1 כדי להציג NRF2 ל CULLIN3 / RBX1 חלבון מורכבים, וכתוצאה מכך obiquitination שלה והשפלה proteasomal הבאים. עם זאת, שינוי התיקון של KEAP1 מעכב את ההצגה של NRF2 ל- UPS המיוצגת על ידי CULLIN3 / RBX1. כתוצאה מכך, NRF2 synthetized החדש בורח השפלה תלויי KEAP1, מצטבר בגרעין ומפעיל גנים המכילים ARE [79], [80], [81], [82].

מתאם E3-ligase? -TrCP הוא גם הומודימר שמשתתף באירועי האיתות הקשורים לזרחן של NRF2 על ידי GSK-3 ?. קינאז זה מזרז שאריות סרין ספציפיות של NRF2 (אספרטט, סרין, גליצין, איזולאוצין סרין; DSGIS) ליצירת תחום השפלה שזוהה אז על ידי? -TrCP ומתויג להתדרדרות פרוטאזום על ידי קומפלקס CULLIN1 / RBX1. הזיהוי של חומצות האמינו הספציפיות שמזורזנות על ידי GSK-3? בדגרון זה נערך על ידי שילוב של מוטגנזה מכוונת אתרים של תחום Neh6, אלקטרופורזה דו-ג'ל [2], [15] וספקטרוסקופיית מסה [26]. כתוצאה מכך, עיכוב של GSK-83? על ידי תרופות או siRNAs סלקטיביות ביותר כנגד איזופורמי GSK-3 הביאו לעלייה ברמות החלבון NRF3. תוצאות דומות נמצאו עם siRNAs כנגד isoforms 2 ו- 1 -TrCP. ייצוב NRF2 בעקבות GSK-2? עיכוב התרחש בפיברובלסטים של העובר בעכבר חסר KEAP3 ובמוטציה של מחיקת NRF1 שבאה לידי ביטוי חסרת שרידי ה- ETGE הקריטיים לקשירה גבוהה לזיקה ל- KEAP2, והדגימה עוד יותר ויסות בלתי תלוי ב- KEAP1.

בהקשר של מחלות ניווניות ניווניות, אנו יכולים לחזות את האפנון של NRF2 על ידי ה- UPS בשתי דרכים שונות. מצד אחד, מערכת KEAP1 תחוש בחוסר איזון חיזור שמקורו בהצטברות חלבונים מקופלת באופן שגוי, בעוד שציר GSK-3 /? - TrCP ישמש כמשתתף פעיל בהעברת איתות שהשתנה על ידי אובדן פרוטוסטאזיס (איור 2).

איור 2 ה- UPS שולט בחוזקה ברמות NRF2. בתנאים הומאוסטטיים, רמות NRF2 נמוכות נשמרות על ידי פעולתם של מתאמי הליגאזות E3 KEAP1 ו-? -TrCP. משמאל, NRF2 נקשר לתחומי הקלץ 'של הומודימר KEAP1 באמצעות מוטיבים של זיקה נמוכה (DLG) ומוטי (ETGE) גבוהים. באמצעות תחום ה- BTB שלה, KEAP1 נקשר בו זמנית למתחם CULLIN3 / RBX1, מה שמאפשר NRF2 בכל מקום והשפלה על ידי פרוטאזום ה- 26 S. יתר על כן, GSK-3? זרחן שאריות Ser335 ו- Ser338 של NRF2 ליצירת תחום השפלה (DpSGIpSL) שזוהה אז על ידי מתאם הליגאז של היוביקוויטין? -TrCP ומתויג להתדרדרות פרוטאזום על ידי מתחם CULLIN3 / RBX1. מימין, עם חשיפה למיני חמצן תגובתי או לאלקטרופילים, משתנים שאריות Cys קריטיות ב- KEAP1, מה שהופך את KEAP1 ללא יכולת לקיים אינטראקציה יעילה עם NRF2 או CULLIN3 / RBX1 ואז גורם תעתיק זה מגדיל את מחצית החיים שלו ואת פעילות התעתיק כלפי ARE- גנים. מסלולי איתות המביאים לעיכוב של GSK-3 ?, זרחון AKT כזה ב- Ser9, מביאים לפגיעה בהידרדרות NRF2 על ידי הפרוטאזום, הצטברות ואינדוקציה של גני יעד.

NRF2 מגביר פעילות UPS באמצעות בקרת תעתיק של יחידות פרוטאזום

NRF2 מווסת את הביטוי של כמה יחידות תת פרוטאזום, וכך מגן על התא מפני הצטברות חלבונים רעילים. נראה כי עשרים גנים הקשורים לפרוטאזום ובכל מקום מווסתים על ידי NRF2, על פי ניתוח מיקרו מערך רחב מ- RNA כבד שהוקם עם ה- NRF2 המשרה D3T [84]. במחקר אחורי, אותם מחברים הראו כי הביטוי של רוב יחידות המשנה של הפרוטאזום 26S שופר עד פי שלושה בכבדים מעכברים שטופלו ב- D3T. רמות החלבון של יחידת המשנה ופעילות הפרוטאזום הועלו באופן מתואם. עם זאת, לא נראה אינדוקציה בעכברים שבהם גורם השעתוק NRF2 הופרע. פעילות היזם של יחידת המשנה PSMB5 (20S) פרוטאזום גדלה עם ביטוי יתר של NRF2 או טיפול עם מפעילים בפיברובלסטים עובריים של העכבר, ו- AREs זוהו במקדם הפרוקסימלי של PSMB5 [85]. הפעלה פרמקולוגית של NRF2 הביאה לרמות ביטוי מוגברות של יחידות משנה פרוטאזומיות מייצגות (PSMA3, PSMA6, PSMB1 ו- PSMB5) רק בפיברובלסטים אנושיים שאינם מבוגרים המכילים NRF2 תפקודי [86]. הפעלת NRF2 במהלך ההסתגלות למתח חמצוני גורמת לביטוי גבוה של PSMB1 (20S) ו- PA28? יחידות משנה (או S11, ויסות פרוטאזום) [87]. יתר על כן, תוצאות מתאי גזע עובריים אנושיים גילו כי NRF2 שולט בביטוי של חלבון ההבשלה הפרוטאזום (POMP), מלווה פרוטאזום, אשר בתורו מווסת את התפשטות תאי הגזע העובריים האנושיים המחדשים את עצמם, שלוש בידול שכבות נבט ותכנות מחדש של התא [ 88]. בסך הכל, מחקרים אלה מצביעים על כך ש- NRF2 מווסת את הביטוי של מרכיבי המפתח של ה- UPS ולכן תורם באופן פעיל לפינוי חלבונים שאחרת היו רעילים.

NRF2-UPS ציר במחלות ניווניות

תפקידו של UPS במחלות נוירודגנרטיביות הוא תחום של דיון אינטנסיבי. מחקרים ראשוניים דיווחו על ירידה בפעילות הפרוטאזום בנקרופים אנושיים של חולים שנפגעו ממחלות ניווניות שונות. עם זאת, מחקרים אחרים המעסיקים במבחנה ובגישות vivo נמצא ללא שינוי או אפילו פעילות proteasome מוגברת (נבדק ב [89]). הסבר אפשרי אחד לפער זה הוא שרמות רכיבי UPS עשויות להשתנות במהלך התקדמות המחלה ובאזורי מוח שונים כפי שהוצע עבור מטרות NRF2.

למרות מחלוקת זו, יש לציין כי up-regulation של ARE המכילים גנים proteasome יחזק את UPS על ידי הגדלת סליקה של חלבונים רעילים במוח. ואכן, אבלציה של NRF1, גם אפנן של התגובה נוגדת חמצון, בתאים העצבית מוביל לפעילות proteasome פגום neurodegeneration. ניסויים immunoprecipitation הכרומטין וניתוח תמליל הוכיחו כי PSMB6 מוסדר על ידי NRF1. בנוסף, פרופיל ביטוי גנים הוביל לזיהוי של NRF1 כווסת תמלילי מרכזי של גנים פרוטאזומיים בנוירונים, דבר המצביע על כך שהפרעות ב- NRF1 עשויות לתרום למחלה של מחלות נוירודגנרטיביות [90]. מעניין ש- NRF1 והאיזופורם הארוך הנקרא TCF11 הראו עד ויסות של גנים של פרוטאזום המכילים ARE על עיכוב פרוטאזומי בלולאת משוב כדי לפצות על פעילות פרוטאוליטית מופחתת [91], [92].

לגבי NRF2, יש מתאם בין הפחתת NRF2, RPT6 (19 S) ו PSMB5 (20 S) רמות של המוח התיכון של עכברים DJ-1 חסרים מטופלים עם parququat neurotoxin [93]. יתר על כן, המתחם המתרחש באופן טבעי sulforaphane (SFN) נותן תמונה חזקה יותר של NRF2 כמו אפנן מכריע של UPS. בניסויים חוץ גופית עם תאים נוירובלסטומה Murine Neuro2A תאים הוכיח ביטוי משופר של יחידות משנה קטליטי של proteasome, כמו גם פעילות peptidase שלה בתגובה SFN. זה התרופה מוגן תאים מימן חמצן בתיווך cytotoxicity וחמצון חלבון באופן תלוי פונקציה proteasome [94]. בנוסף, ליו ועמיתים לעבודה העסיקו עכבר עיתונאי כדי לפקח על פעילות ה- UPS בתגובה ל- SFN במוח. עכברים אלה בכל מקום להביע את החלבון הקרינה הירוקה (GFP) התמזגו אות השפלה מכוננת המקדמת השפלה מהירה על ידי UPS (GFPu). ב קליפת המוח, SFN הפחית את רמת GFPu עם עלייה מקבילה ב chymotrypsin כמו (PSMB5), כמו caspase (PSMB2), ו טריפסין כמו (PSMB1) פעילויות של פרוטאסום 20 S. בנוסף, טיפול של הנטינגטון נגזרות תאים עם SFN גילה כי הפעלת NRF2 משופרת השפלה mHtt מופחת cytotoxicity mHtt [95]. המנגנון העיקרי של פעולת SFN הוא באמצעות אינדוקציה של NRF2 [96]. התרומה הספציפית של NRF2 צריכה להתייחס לשימוש במערכות NRF2-null במחקרים נוספים.

חיבור פונקציונלי בין NRF2 ו Macroautophagy

NRF2 רמות חלבון מאופננים על ידי חלבון מתאם P62

Autophagy מתייחס השפלה של מרכיבים cytosolic בתוך lysosomes. תהליך זה משמש לניקוי של חלבונים ארוכי טווח ו misfolded כמו גם פגום האברונים. קישור ישיר בין NRF2 לבין autophagy נצפתה לראשונה בחלבון המתאם p62, המכונה גם SQSTM1 [97], [98], [99], [100], [101]. חלבון זה מעביר חלבונים מיובאים כדי machinsies השפלה פרוטאזומאלית ו lysosomal ו sequesters פגומים חלבונים לתוך אגרגטים לפני השפלה שלהם. P62 מציג תחום הקשור ל- Ubiquitin (UBA), המחייב חלבונים הנמצאים בכל מקום, ואזור אינטראקציה LC3 (LIR) לאינטגרציה עם הממברנה האוטופגוזומלית דרך הקולטן האוטופאגי LC3.

למרות שהאינדוקציה בתיווך p62 של NRF2 וגני היעד שלו דווחה לראשונה בשנת 2007 [102], המנגנון המולקולרי לא הובן במלואו עד לגילוי האינטראקציה שלו עם KEAP1 [103], [98], [99], [100 ], [101]. Komatsu ועמיתים לעבודה זיהו אזור אינטראקציה של KEAP1 (KIR) ב- p62 שקשר את KEAP1 באותו כיס משטח בסיסי כמו NRF2 ועם זיקה מחייבת הדומה למוטיב ETGE ב- NRF2, דבר המצביע על תחרות בין p62 ל- NRF2. ההזרחה של Ser351 במוטיב KIR ב- p62 (349-DPSTGE-354) הוכחה כמגבירה את זיקתה ל- KEAP1, ומתחרה בכריכת NRF2 ומאפשרת הצטברותה והפעלת תעתיק של גני היעד שלה [98], [99]. למעשה, ביטוי יתר של p62 הוביל להפחתת הנפקות של NRF2 ולהתייצבות כתוצאה מכך, כמו גם אינדוקציה של גני היעד שלו [104]. הוצעו כמה קינאזות להשתתף בזרחון p62. היעד של יונקים של קומפלקס רפמיצין 1 (mTORC1) עשוי להיות מעורב, מכיוון שטיפול במעכב mTOR רפמיצין דיכא את הזרחון של p62 ואת הסדרת ה- KEAP1 כלפי מטה לאחר טיפול בארסניט. לאחרונה הוכח כי TGF -? - מופעל קינאז 1 (TAK1) יכול גם לפוספורילציה של p62, דבר המשפר את ההשפלה של KEAP1 ואת ויסות NRF2. מחברי מחקר זה מציעים שזו דרך לווסת את הרדוקסטזיס הסלולרי בתנאים של מצב יציב, שכן מחסור ב- TAK1 מעלה את ויסות ה- ROS בהיעדר חמצון אקסוגני ברקמות עכבר שונות במקביל להפחתה ברמות החלבון NRF2 [105 ].

מבנה p62 חסר תחום UBA היה מסוגל עדיין מחייב KEAP1, מרמז כי האינטראקציה לא תלויה keAP1 ubiquitinated [101]. עם זאת, ההומולוג p62 ב תסיסנית melanogaster, בשם Ref (2), אינו מכיל מוטיב KIR ואינו אינטראקציה ישירה עם DmKEAP1, למרות שזה יכול להיקשר dmKEAP1 מיובאים באמצעות תחום UBA. יתר על כן, DmKEAP1 יכול לתקשר ישירות עם Atg8 (הומולוג כדי LC3 יונקים). חסר KEAP1 תוצאות Atg8 ו autophagy אינדוקציה תלויה NRF2 אורטולוג CncC ו עצמאית על TFEB / MITF [106]. הקשר בין NRF2 לבין autophagy נראה כי נשמר, המדגיש את הרלוונטיות הפונקציונלית שלו.

אינדוקציה של NRF2 על ידי p62 הוא תוצאה של שני המתחרים לאגד KEAP1 ו השפלה של KEAP1 ב lysosome. השתקת p62 עם siRNA הכפילה את מחצית החיים של KEAP1 במקביל לירידה ב- NRF2 ובגני המטרה שלו [101]. בהסכמה, אבלציה של ביטוי p62 הוכיח רמות גבוהות של KEAP1 לעומת עכברים סוג בר. רלוונטי מאוד, את תוספת KEAP1 רמות לא הושפע מעכבי proteasome אבל צומצם תחת autopagy רעב רעב [107]. למעשה, KEAP1 נמצא בתאי יונקים ב שלפוחית ​​אוטופגית מעוטרת עם p62 ו LC3 [99], [100], [103]. כל הנתונים הללו מציעים כי KEAP1 הוא מצע של מכונות macroautophagy, אבל בעיה זו יש לנתח עם פירוט רב יותר בגלל קיומו של כמה תוצאות שנויות במחלוקת. KEAP1 רמות החלבון גדלו בעכברים Atg7-null, גורם מפתח של macroautophagy [107], אך עיכוב תרופתי של macroautophagy עם torin1, E64 / pepstatin או bafilomycin לא הצליחו לצבור KEAP1 [107], [100]. בסך הכל, תוצאות אלה מרמזות כי רמות p62 מוגברת לשרש KEAP1 לתוך vacuoles autophagic וכנראה תוצאות אלה השפלה autopagic KEAP1 המאפשר הפעלה NRF2 (איור 3). שני מחקרים שונים דיווחו כי החומצה הגופרית מפחית את הסיכון של SESTRINS לתפקיד חשוב בהקשר זה. SESTRIN 2 אינטראקציה עם p62, KEAP1 ו RBX1 ו מקל על השפלה תלוי p62 של הפעלה KEAP1 ו NRF2 של גנים היעד [108]. מחקר נוסף הראה כי SESTRIN 2 אינטראקציה עם ULK1 ו p62, קידום זירזון של p62 ב Ser403 אשר הקל על השפלה של חלבונים המטען כולל KEAP1 [109].

איור 3 רמות NRF2 מוסדרים על ידי p62 חלבון מתאם. זרחון של סר 351 ב מוטיב KIR של p62 (349-DPSTGE-354) על ידי mTORC1, TAKXNXX או קינאזות אחרות תוצאות זיקה מוגברת מחייב KEAP1 בשל הדמיון מוטיב ETGE ב NRF1. כתוצאה מכך, p2 phosphorylated מחליף NRF62 וקושר KEAP2. מוטיב LIR ב p1 מאפשר אינטראקציה עם LC62 בקרום האוטופגוסומלי, כך p3-KEAP62 מורכבים בסופו של דבר מושפל הליזוזום. כתוצאה מכך NRF1 הוא מסוגל לצבור, translocate לגרעין ולהגדיל את שעתוק של גנים המכילים ARE, כולל p2. מנגנון רגולציה זה מספק תגובה NRF62 ניכרת, שכן KEAP2 צריך להיות מסונתז החדש על מנת לעכב פעילות NRF1.

אפנון של גנים Macroautophagy ידי NRF2

NRF2 מסדיר את הביטוי של גנים רלוונטיים עבור macroautophagy, כמו גם עבור UPR ו- UPS. הראיות הראשונות הגיעו ממחקרים שבהם הביטוי p62 הוצג כגורם לחשיפה ל electrophiles, ROS ו תחמוצת החנקן [110], [111], [112]. המנגנון של אינדוקציה תוארה כמה שנים מאוחר יותר עם המסקנה כי p62 מכיל פונקציונלי ARE האמרגן הגן שלה [99]. במחקר שנערך לאחרונה, כמה תפקודים אחרים נמצאו ו תוקף לאחר ניתוח ביואינפורמטיקה בדיקות CHIP. יתר על כן, fibroblasts עובריים עכבר נוירונים קליפת המוח מ Nrf2- נוקאאוט עכברים הציג ביטוי p62 מופחת, אשר ניתן להציל עם lentivirus NRF2- להביע. באופן דומה, חסר NRF2 הפחית רמות p62 נוירונים נפצעו עכברים בהיפוקמפוס [36]. לכן, הוצע כי NRF2 ההפעלה מגבירה את רמות p62, וכתוצאה מכך השפלה KEAP1 ו העדפה נוספת ייצוב NRF2 ב לולאה משוב חיובי. מנגנון לא קנוני זה של אינדוקציה NRF2 מחייב שינויים בביטוי גנים, ועשוי להיות תגובה רלוונטית למתח מתמשך של תאים סלולריים.

חלבון זיהוי המטען NDP52 הוכח להיות מוסדר transcriptionally ידי NRF2. NDP52 עובד באופן דומה p62, זיהוי חלבונים מיובאים אינטראקציה עם LC3 דרך תחום LIR, כך המטענים מושפלים ליזוזומים. חמש משוערות AREs נמצאו Ndp52 רצף DNA רצף. שלושה מהם זוהו עם קונסטרוקציות מוטנטיות שונות ובדיקות שבב כבלתי נמנעות עבור תעתיק NRF2 בתיווך Ndp52 [113]. ראוי לציין, רמות NRp52 mRNA הופחתו בהיפוקמפוס של עכברים Nrf2-knockout. אחד sequences אלה היה גם תוקף במחקר עצמאי כמו NRF2- מוסדר ARE [36].

עם זאת, תפקידו של NRF2 ב אפנון של autophagy אינו מוגבל אינדוקציה של שני אלה חלבונים הכרה. כדי לקבל תובנה עמוקה יותר בתפקיד של NRF2 באפנון של גנים נוספים הקשורים ל- autophagy, הקבוצה שלנו בדקה את מסד הנתונים של הכרומטין immunoprecipitation ENCODE עבור שני חלבונים, MAFK ו- BACH1, המחייבים את ה- NRF2. באמצעות סקריפט שנוצר מתוך JASPAR של קונסנזוס ARE רצף, זיהינו מספר תחליפי AREs בגנים autophagy רבים. שתים עשרה רצפים אלה היו תוקף כמו NRF2 מוסדר AREs תשעה גנים autopagy, אשר הביטוי היה פחתה עכבר fibroblasts העובר של Nrf2- נוקאאוט עכברים אבל יכול להיות משוחזר על ידי וירוס lentivX NRF2. המחקר שלנו הראה ש- NRF2 מפעיל את הביטוי של כמה גנים המעורבים בשלבים שונים של התהליך האוטופאגי, כולל ייזום אוטופאגי (ULK1), זיהוי מטען (p62 ו- NDP52), היווצרות אוטופגוזום (ATG4D, ATG7 ו- GABARAPL1), התארכות (ATG2B ו- ATG5 ), ו autolysosome אישור (ATG4D). כתוצאה מכך, שטף autophagy בתגובה מי חמצן נפגם כאשר NRF2 נעדר [36].

הרלוונטיות של NRF2-Mediated Macroautophagy ביטוי גנים בהפרעות ניווניות

פגמים אוטופגים הוכח כממלא תפקיד חשוב במספר מחלות נוירודגנרטיביות [114] ואבלציה של אוטופאגי מוביל לניוון מוחי בעכברים [115], [116]. עכברים Atg7-knockout גילה כי חוסר autophagy תוצאות הצטברות p62 ב-הכללה חיובי גופים היוביקוויטין. KEAP1 היה משוחרר אלה גופים הכללה, המוביל ייצוב NRF2 ו אינדוקציה של גנים היעד [103]. חשוב לציין, הצטברות מוגזמת של p62 יחד עם חלבונים אוביקטיניטדה זוהו במחלות נוירודגנרטיביות, כולל AD, PD ו- ALS [117]. למעשה, נוירונים המבטאים רמות גבוהות של APP או TAU של חולי AD הביעו גם p62 ו- NRF2 גרעיני, דבר המצביע על ניסיונם להשפיל אגרגטים תוך-רחמיים באמצעות אוטופאגי [36].

מחסור ב- NRF2 מחמיר את צבירת החלבונים בהקשר לספירה. למעשה, רמות מוגברות של TAU זרחני ובלתי מסיס נמצאות בעכברי Nrf2- נוקאאוט, אם כי לא ניתן היה לזהות הבדל בפעילות קינאז או פוספטאז בהשוואה לרקע הטבעי [113]. חשוב לציין, כי הוכח כי NDP52 משתף פעולה עם TAU בתאי עצב עכבריים, ואינטראקציה ישירה בין phospho-TAU ו- NDP52 הוצגה על ידי ניסויים משותפים לאימונומנטריפולציה הן בעכברים והן בדגימות AD, והצביעו על תפקידה בהשפלת TAU מעניין שהשתקת NDP52, p62 או NRF2 בנוירונים הביאה לעלייה ב- phospho-TAU [113], [118]. יתר על כן, אגרגטים מוגדלים של APP תוך-עצביים נמצאו בהיפוקמפוס של APP / PS1? E9 עכברים כאשר NRF2 נעדר. זה נמצא בקורלציה עם סמני אוטופאגיה ששונו, כולל עלייה ביחס פוספו-mTOR / mTOR ו- phospho-p70S6k / p70S6k (המעיד על עיכוב אוטופגי), רמות מוגברות של טרום קתפסין D ומספר גדול יותר של גופים רב-מולקולריים [119]. בעכברים המבטאים יחד APP אנושי (V717I) ו- TAU (P301L), מחסור ב- NRF2 הוביל לרמות מוגברות של סך הכל ו- phospho-TAU בשבריר המסיס והגדלת אגרגטים של APP תוך-עצביים, יחד עם רמות עצביות מופחתות של p62, NDP52, ULK1, ATG5 ו- GABARAPL1. לוקליזציה משותפת בין חלבון המתאם p62 ל- APP או TAU צומצמה בהיעדר NRF2 [36]. בסך הכל, תוצאות אלו מדגישות את החשיבות של NRF2 באוטופגיה עצבית.

גורמים שונים שעתוק לפעול בקואורדינטות כדי לשנות את פרוטאוסטזיס

תחת מצב מצב יציב, proteostasis נשלטת באמצעות אינטראקציות חלבון חלבון שלאחר השינויים translational קבלת תגובה מהירה. עם זאת, הסתגלות תאית דורש תקנה תעתיק של UPR, UPS ו autophagy גנים. בהתחשב בכך שתאי עצב נשלחים ברציפות לעלבונות רעילות ברמה נמוכה, כולל מתח חמצוני ופרוטוקסי, חיזוק של פרוטאוזאזיס המושרה על ידי אפנון תעתיק עשוי לסייע במניעת התנוונות המוחית.

במקרה של UPR, ההפעלה של כל אחת משלוש הזרועות תוביל בסופו של דבר להשראה תעתיק של גנים מסוימים (שנבדקו ב- [43]). לדוגמה, מקטע ATF6 הנגזר (ATF6f) נקשר למרכיבי תגובה של מתח (ERSE) וגורם לביטוי של מספר גנים, כולל XBPI, BIP ו- CHOP. בנוסף, איתות PERK מוביל להפעלת גורם השעתוק ATF4, אשר שולט בביטוי של מספר גנים הקשורים ל- UPR וכמה אחרים, כולל גני המטרה NRF2 Hmox1 ו- p62. לבסוף, תוצאות IRE1 גורמות לדור של גורם שעתוק פעיל, שחובר XBP1 (XBP1), השולט בתעתיק של חלבונים המקודדים גנים המעורבים בקיפול חלבונים.

מצד שני, NRF1 הוכח להיות הכרחי ביטוי גנים proteasomal במוח, כמו עכברים Nrf1- נוקאאוט הציג ביטוי מופחת של גנים קידוד יחידות משנה שונות של הליבה 20S, כמו גם את מורכבות 19S הרגולציה יחד עם תפקוד proteasomal לקוי [90 ]. הן NRF1 והן NRF2 מתחברות לרצפי ARE באזורי היזם של גני המטרה שלה, דבר המצביע על כך שהן חופפות פעילויות תמלוליות, למרות שהן נבדלות במנגנונים הרגולטוריים שלהן ובלוקליזציה הסלולרית [120].

גורמי תעתיק של Forkhead תיבת O (FOXO) משפחה לשלוט על הביטוי של מספר רב של גנים הקשורים autophagy. בדומה למה שקורה עם NRF2, ישנם מספר רבדים של רגולציה על פעילותם של חברי FOXO, אשר יכולים להיגרם על לחץ תזונתי או חמצוני [121]. לבסוף, גורם שעתוק TFEB, נחשב הרגולטור הראשי של ביוגנזה ליזוזומלית, ממלא תפקיד מכריע ברגולציה של autophagy תחת מצבי לחץ תזונתי. לפיכך, עיכוב של mTORC1 מוביל טרנסלוקציה גרעינית של TFEB ו אינדוקציה של הביטוי של גנים autophagy [122].

בסך הכל, קיומו של הרגולטורים תעתיק שונים של machineries אלה גם מציע crosstalk ומנגנוני מיותר חלקית אשר עשוי להבטיח פרוטאוזיס בנסיבות שונות. לפיכך, NRF2 עשוי להיות תפקיד רלוונטי ברקמות התומכות ברמות גבוהות של לחץ חמצוני. לדוגמה, מתח חמצון המושרה NRF2 עשוי לפעול בתנאים עשירים מזין כדי transcriptionally up- להסדיר autophagy, בדומה למה שנמצא עבור TFEB תחת תנאי רעב. יתר על כן, המוח פועל בעיקר בתנאים מזינים עשירים, בהצבת NRF2 כמנגנון רלוונטי להפעיל autophagy בנוירונים.

מבטיח פוטנציאל טיפולי ל- NRF2 בחלבונים

בשנים האחרונות, חלה התקדמות רבה בידע של תפקידים רגולטוריים של UPR, UPS ו autophagy על פעילות NRF2, כמו גם את תמליל הדדי NRF2 בתיווך של רכיבים אלה שלוש מערכות. לכן, אפשרויות טיפוליות חדשות עלולות להתבסס על ניצול של NRF2 כווסת מכריע של שחרור חלבונים במחלות ניווניות.

עם זאת, שאלה מרכזית שנותרה היא האם יהיה שימושי או מזיק להגביר את רמות ה- NRF2 במוח. ניתוח נתונים אפידמיולוגיים עשוי לספק תשובה חלקית, מכיוון שהוא מצביע על כך שהגן NFE2L2 הוא פולימורפי ביותר וכמה פולימורפיזמים בודדים של נוקליאוטידים שנמצאים באזור הרגולציה של היזם שלו עשויים לספק מגוון של "פיזיולוגיות" בביטוי גנים ברמת האוכלוסייה וכמה הפלוטיפים. היו קשורים לירידה בסיכון ו / או הופעה מאוחרת של AD, PD או ALS [123]. יתר על כן, כפי שנדונו על ידי הייז ועמיתיו [124], לאפקט NRF2 עשויה להיות תגובה בצורת U, כלומר רמות נמוכות מדי של NRF2 עלולות לגרום לאובדן הגנת הציטוטים ולרגישות מוגברת ללחץ, בעוד שיותר מדי NRF2 עלול להפר את האיזון ההומאוסטטי כלפי תרחיש רדוקטיבי (מתח רדוקטיבי), שיעדיף קיפול שגוי של חלבונים וצבירה. רמות NRF2 נמוכות במוח תומכות ברעיון כי ויסות קל-עלול עשוי להספיק בכדי להשיג תועלת בתנאים פתולוגיים. למעשה, התפקיד המגן של הפעלת תרופת תאים NRF2 בתיווך של פינוי חלבונים הוצג בתרבית תאי ניוון עצבים שונים ובמודלים in vivo.

SFN הוא פעיל NRF2 תרופתי שהוכח כי הוא גורם לביטוי גנים פרוטאזומלי ואוטופגי [95], [36]. מעניין ש- Jo ועמיתיו הוכיחו כי SFN הפחיתה את רמות ה- TAU הזרחני והגדילה את Beclin-1 ו- LC3-II, דבר המצביע על כך שהפעלת NRF2 עשויה להקל על השפלה של חלבון רעיל זה באמצעות אוטופאגיה [113]. יתר על כן, השפלה של mHtt שופרה עם SFN, וזה הוחזר באמצעות שימוש ב- MG132, דבר המצביע על השפלה פרוטאזומלית של חלבון רעיל זה [95]. השפלה בתיווך אוטופאגי של TAU זרחני ובלתי מסיס דווחה עם הפיסטין הפלבנואיד האורגני. תרכובת זו הצליחה לגרום לאוטופאגיה על ידי קידום בו זמנית הפעלה וטרנסלוקציה גרעינית של TFEB ו- NRF2, יחד עם כמה מגני היעד שלה. תגובה זו נמנעה על ידי השתקת TFEB או NRF2 [125]. Bott ועמיתיו דיווחו על השפעות חיוביות של פעיל NRF2, NRF1 ו- HSF1 בו זמנית על רעילות חלבונים באטרופיית שרירים בעמוד השדרה והבולברית, הפרעה ניוונית ניוונית הנגרמת על ידי הרחבת חזרת CAG מקודדת פוליגלוטמין בה קיימים אגרגטי חלבון [126]. הפוטנציאל של הפעלת NRF2 לטיפול בהפרעות ניווניות הוכח באישור BG-12, הניסוח האוראלי של NRF2 המושרה דימתיל פומאראט (DMF), לטיפול בטרשת נפוצה [127], [128]. ההצלחה של DMF עם מחלות אוטואימוניות עם מרכיב דלקתי חזק מעידה על כך שמחלות ניווניות עשויות להפיק תועלת ממיקום תרופה זו. במחקר פרה-קליני שנערך לאחרונה על מודל? -Synucleinopathy של PD, DMF הוכח כמגן-נוירו, בין השאר בגלל זירוזו של אוטופאגיה [129]. מחקרים המדווחים על השפעות חיוביות של NRF2 על ניוון נוירוני אך לא מתמקדים בהשפעתו על פינוי חלבונים נמצאים בשפע עוד יותר (לסקירה מקיפה ראה [7]). זה די רלוונטי, מכיוון שהוא מדגיש את התהליכים המזיקים המרובים שניתן לכוון בו זמנית על ידי מכה אחת ב- NRF2, כולל מתח חמצוני, דלקת עצבית או תפקוד לקוי של המיטוכונדריה. עם זאת, יהיה צורך בעבודה עתידית כדי לקבוע בהחלט אם הפעלה תרופתית של NRF2 עשויה להיות אסטרטגיה תקפה כדי להקל על פירוק חלבונים רעילים במוח.

כפי שהוסבר קודם, החריף את GSK-3? דווח על פעילות במחלות ניווניות ניווניות והועלו השערות שכתוצאה מכך הפחתת NRF2 יכולה להיות אחראית חלקית לתוצאה המזוייעת. בתנאים פתולוגיים אלה, מעכבי GSK-3 יכולים גם לשתף פעולה בכדי להגביר את רמות ה- NRF2 ואת הפרוטוסטאזיס. ההשפעות המועילות של מעכבי GSK-3 דווחו במודלים שונים של ניוון עצבי, ויותר מעניין שהדחקת GSK-3 הוכח כמפחית את רמות החלבונים הרעילים [130], [131], [132], [133]. למרות שעדיין לא נצפו קשר ישיר בין עיכוב GSK-3 לבין ויסות תעתיק NRF2 של גנים המקדמים פרוטוסטאזיס, סביר להניח כי ויסות למטה של ​​פעילות GSK-3 יביא לעלייה ברמות NRF2, שבסופו של דבר תביא לחיזוק מחוזק. פרוטוסטאזיס.

פעילות התעתיק של NRF2 כמו גם יכולת התאים לשמור על פרוטוסטאזיס יורדת עם הגיל, גורם הסיכון העיקרי להתפתחות מחלות ניווניות. סביר לחשוב כי חיזוק NRF2 וכתוצאה מכך פרוטאוסטאזיס, לפחות, יעכב את הצטברותם של אגרגטי חלבונים וניוון עצבי. ואכן, טיפול בפיברובלסטים מזדקנים אנושיים עם חומצה 18--glycyrrhetinic (18? -GA) טריטרפנואיד קידם הפעלת NRF2, מה שהוביל לאינדוקציה פרוטאזום ותוחלת חיים משופרת. מחקר זה מצביע על כך שהפעלה תרופתית של NRF2 אפשרית גם בסוף החיים [86]. יתר על כן, מחקר מאוחר יותר הראה כי תרכובת זו תיווכה הפעלת SKN-1 והפעלת פרוטאזום ב- C.elegans עם השפעות מועילות על התקדמות AD במודלים של נמטודות רלוונטיות [134].

כל הדברים, NRF2 אינדוקציה של גנים הקשורים proteostasis נראה מועיל ב proteinopathies שונים.

Sulforaphane והשפעותיו על סרטן, תמותה, הזדקנות, מוח והתנהגות, מחלות לב ועוד

Isothiocyanates הם כמה תרכובות צמח החשוב ביותר שאתה יכול לקבל בתזונה. בסרטון זה אני עושה את המקרה המקיף ביותר עבור אותם כי היה אי פעם. טווח קשב קצר? דלג לנושא המועדף עליך על ידי לחיצה על אחת מנקודות הזמן הבאות. ציר זמן מלא להלן.

מקטעי מפתח:

  • 00: 01 - סרטן ותמותה
  • 00: 19 - הזדקנות
  • 00: 26: 30 - המוח וההתנהגות
  • 00: 38 - סיכום סופי
  • 00: 40 - מינון

ציר זמן מלא:

  • 00: 00: 34 - מבוא של sulforaphane, מוקד עיקרי של הסרטון.
  • 00: 01: 14 - הצריכה של הצומח הצמח והפחתת בתמותה מכל הסיבות.
  • 00: 02 - סיכון לסרטן הערמונית.
  • 00: 02 - סיכון לסרטן שלפוחית ​​השתן.
  • 00: 02 - סרטן הריאה אצל מעשנים מסתכן.
  • 00: 02 - סיכון לסרטן השד.
  • 00: Hypothetical: מה אם כבר יש לך סרטן? (התערבות)
  • 00: 03: 35 - מנגנון מתקבל על הדעת המניע את הנתונים התמותה הסרטן ותמותה.
  • 00: 04 - Sulforaphane וסרטן.
  • 00: 05: 32 - ראיות לבעלי חיים המראים השפעה חזקה של ברוקולי לנבוט לחלץ על התפתחות שלפוחית ​​השתן בעכברים.
  • 00: 06 - השפעת תוסף ישיר של sulforaphane בחולי סרטן הערמונית.
  • 00: 07: 09 - ביואקומולציה של מטבוליטים איסוציאיאנט ברקמת השד בפועל.
  • 00: 08: 32 - עיכוב של תאי גזע סרטן השד.
  • 00: 08: 53 - שיעור היסטוריה: brassicas הוקמו כבעלי תכונות בריאותיות גם ברומא העתיקה.
  • 00: 09 - היכולת של Sulforaphane כדי לשפר את הפרשת מסרטן (בנזין, acrolein).
  • 00: 09 - NRF51 כמתג גנטי באמצעות רכיבי תגובה נוגדי חמצון.
  • 00: 10 - כיצד NRF10 ההפעלה משפר הפרשת מסרטן באמצעות גלוטתיון- S-conjugates.
  • 00: 10: 34 - נבטים בריסל להגדיל גלוטתיון- S-transferase ולהפחית נזק ל- DNA.
  • 00: 11 - ברוקולי לנבוט משקה מגביר הפרשת בנזין על ידי 20%.
  • 00: 13: 31 - ברוקולי לנבוט homogenate מגביר אנזימים נוגדי חמצון בדרכי הנשימה העליונות.
  • 00: 15: צריכת הצליבה הצמחית ותמותה ממחלות לב.
  • 00: 16 - ברוקולי נובט אבקת משפר את רמת השומנים בדם ואת הסיכון למחלות לב כל סוג של חולי סוכרת מסוג 55.
  • 00: 19 - תחילת סעיף ההזדקנות.
  • 00: 19 - דיאטה עשירה ב- Sulforaphane משפרת תוחלת חיים של חיפושיות מ- 21 ל- 15% (בתנאים מסוימים).
  • 00: 20 - חשיבותה של דלקת נמוכה לאריכות ימים.
  • 00: 22: CROCiferous ירקות ברוקולי נבט אבקה נראה להקטין מגוון רחב של סמנים דלקתיים בבני אדם.
  • 00: 23: 40 - סיכום וידאו: סרטן, קטעים מזדקנים
  • 00: 24: 14 - מחקרים שנעשו על ידי עכברים מצביעים על כך ש- sulforaphane עשוי לשפר את תפקוד המערכת החיסונית הזקנה בגיל מבוגר.
  • 00: 25 - שיפור צבע השיער גדל במודל עכבר של מקריח. תמונה ב 18: 00: 26.
  • 00: 26 - התחלה של המוח והתנהגות סעיף.
  • 00: 27: 18 - השפעת ברוקולי לנבוט לחלץ על אוטיזם.
  • 00: 27: 48 - השפעת glucoraphanin על סכיזופרניה.
  • 00: 28: 17 - תחילת הדיון בדיכאון (מנגנון ומחקרים סבירים).
  • 00: 31 - מחקר עכבר באמצעות 21 דגמים שונים של לחץ המושרה על-ידי דיכאון הראה sulforaphane ביעילות דומה כמו fluoxetine (prozac).
  • 00: 32: 00 - מחקר מראה בליעה ישירה של glucoraphanin בעכברים הוא יעיל באופן דומה במניעת דיכאון מ תבוסה חברתית מודל הלחץ.
  • 00: 33 - תחילתו של קטע neurodegeneration.
  • 00: 33 - Sulforaphane ואלצהיימר.
  • 00: 33 - Sulforaphane ומחלת פרקינסון.
  • 00: 33 - Sulforaphane והונגטינגטון.
  • 00: 34: 13 - Sulforaphane מגביר את החלבונים בהלם חום.
  • 00: 34 - תחילתו של סעיף פגיעה מוחית טראומטית.
  • 00: 35: 01 - Sulforaphane מוזרק מיד לאחר TBI משפר זיכרון (מחקר העכבר).
  • 00: 35: 55 - Sulforaphane ופלסטיות עצבית.
  • 00: 36: 32 - Sulforaphane משפר את הלמידה במודל של סוכרת מסוג II בעכברים.
  • 00: 37: 19 - Sulforaphane ו Duchenne ניוון שרירים.
  • 00: 37: עיכוב מיוסטטין בתאי לווין שרירים (במבחנה).
  • 00 - 38: 06: סיבת וידאו מאוחרת: תמותה וסרטן, נזק ל- DNA, מתח חמצוני ודלקת, הפרשת בנזן, מחלות לב וכלי דם, סוכרת מסוג II, השפעות על המוח (דיכאון, אוטיזם, סכיזופרניה, ניוון מוחי), נתיב NRF2.
  • 00: 40 - מחשבות על חישוב מנה של נבטי ברוקולי או sulforaphane.
  • 00: 41: אנקדוטות על הנבטה בבית.
  • 00: על טמפרטורת בישול ופעילות sulforaphane.
  • 00: 43: 45 - חיידקי הבטן המרה של sulforaphane מ glucoraphanin.
  • 00: 44 - תוספי מזון טובים יותר בשילוב עם מירוזינאז פעיל מירקות.
  • 00: 44 - טכניקות בישול וירקות cruciferous.
  • 00: 46 - Isothiocyanates כמו goitrogens.
ד"ר חימנז לבן מעיל
הגורם הגרעיני erythroid נגזר 2 (NF-E2) גורם מקושר 2, הידוע גם בשם Nrf2, הוא גורם שעתוק אשר מסדיר את הביטוי של מגוון של antioxidant ו detoxifying אנזימים. מחקרים הראו גם את תפקידה בשליטה על לחץ חמצוני. רוב מחלות העצבים, כגון מחלת האלצהיימר ומחלת פרקינסון, מאופיינות בלחץ חמצוני ודלקת כרונית, המטרות הנפוצות של שיטות הטיפול Nrf2. ד"ר אלכס Jimenez DC, תובנה CCST

הערות סיכום

גורם שעתוק NRF2 מנצח על תגובה פרוטוסטטית על ידי חישה ושינוי שינויים ב- UPR, UPS ו- autophagy (איור 4). כתוצאה מכך, היעדר NRF2 הוכח להחמיר פרוטאופאתיה, דבר המצביע על כך ש- NRF2 נחוץ לסילוק חלבונים אופטימלי. בסך הכל, אנו יכולים לשער כי NRF2 עשוי להיות יעד טיפולי מעניין עבור proteinopathies.

איור 4 NRF2 כמו רכזת חיבור proteotoxic נגזר אותות חירום לתגובה תגובת מגן. הצטברות של חלבונים נפרשים / misfolded יוביל ההפעלה של התגלו חלבון התגלו (UPR) בחדר מיון. הפעלה של PERK או MAPK עלולה לגרום לאינדוקציה של תעתיק ה- Gpx8 של ה- ER ומספר אנזימים המסדירים רמות GSH, קריטיים כדי להבטיח קיפול חלבונים נכון. פרוטאין אגרגטים לעכב פעילות proteasome (UPS), ככל הנראה הימנעות השפלה NRF2. NRF2 הוכח במיוחד כדי לשנות את תמלול של גנים PsMA3, Psma6, Psmb1, Psmb5 ו Pomp. כמה יחידות משנה אחרות היו למעלה מוסדר בצורה NRF2 תלויי בתגובה D3T, כנראה הגדלת רשימה של יחידות proteasome regulated ידי NRF2. Autophagy הוא המסלול העיקרי עבור השפלה של אגרגטים חלבון. Autophagy גם מסדיר את NRF2, חיבור זה נתיב השפלה עם NRF2 אינדוקציה תעתיק של p62, Ndp52, Ulk1, Atg2b, Atg4c, Atg5, Atg7 ו Gabarapl1.

תודות

Sciencedirect.com/science/article/pii/S2213231716304050

על פי המאמר לעיל, בעוד הסימפטומים של מחלות נוירודגנרטיב ניתן לטפל באמצעות מגוון רחב של אפשרויות הטיפול, מחקרים הראו כי הפעלה Nrf2 יכול להיות גישה טיפולית מועיל. כי Nrf2 פעילים מכוונים למנגנונים רחבים של מחלות, כל מחלות ניווניות ניווניות יכולות להפיק תועלת מהשימוש בגורם השעתוק Nrf2. הממצאים של Nrf2 חוללו מהפכה בטיפול במחלות ניווניות ניווניות. היקף המידע שלנו מוגבל לבעיות בריאות כירופרקטיקה ובעמוד השדרה. כדי לדון בנושא, אל תהסס לשאול את ד"ר חימנז או ליצור איתנו קשר ב 915-850-0900 .

אושר על ידי ד"ר אלכס Jimenez

הפניה ל:Sciencedirect.com

לחצן התקשרות הירוק H. PNG

נושא נוסף דיון: הקלה על כאבי ברכיים ללא ניתוח

כאבי ברכיים הם סימפטום ידוע שיכול להופיע בגלל מגוון פציעות ו / או מצבים בברך, כולל פציעות ספורט. הברך היא אחד המפרקים המורכבים ביותר בגוף האדם מאחר והיא מורכבת מהצטלבות של ארבע עצמות, ארבע רצועות, גידים שונים, שני מניסקיים וסחוס. על פי האקדמיה האמריקאית לרופאי משפחה, הגורמים השכיחים ביותר לכאבי ברכיים כוללים סובלוקסציה ברגליים, דלקת גידים ברגל או ברך מגשר ומחלת אוסגוד-שלאטר. למרות שכאב ברכיים סביר להניח להופיע אצל אנשים מעל גיל 60, כאבי ברכיים יכולים להופיע גם אצל ילדים ומתבגרים. ניתן לטפל בכאבי ברכיים בבית בשיטות ה- RICE, אולם פגיעות קשות בברכיים עשויות לדרוש טיפול רפואי מיידי, כולל טיפול כירופרקטי.

תמונה של הילד קריקטורה

EXTRA EXTRA | חשוב נושא: מומלץ אל Paso, TX Chiropractor

***

היקף העיסוק המקצועי *

המידע כאן בנושא "הבנת Nrf2 והשפעתה על מחלות נוירודגנרטיביות" אינו מיועד להחליף מערכת יחסים אחד על אחד עם איש מקצוע מוסמך בתחום הבריאות או רופא מורשה ואינו ייעוץ רפואי. אנו ממליצים לך לקבל החלטות בתחום הבריאות על סמך המחקר והשותפות שלך עם איש מקצוע מוסמך.

מידע על בלוג ודיונים בהיקף

היקף המידע שלנו מוגבל לכירופרקטיקה, שרירים ושלד, תרופות פיזיות, בריאות, אטיולוגי תורם הפרעות ויסרוסומטיות במצגות קליניות, דינמיקה קלינית של רפלקס סומטויסצרלי, תסביכי תת-לוקסציה, בעיות בריאותיות רגישות ו/או מאמרים, נושאים ודיונים ברפואה תפקודית.

אנו מספקים ומציגים שיתוף פעולה קליני עם מומחים מדיסציפלינות שונות. כל מומחה נשלט על ידי היקף העיסוק המקצועי שלו וסמכות הרישיון שלו. אנו משתמשים בפרוטוקולים פונקציונליים של בריאות ובריאות כדי לטפל ולתמוך בטיפול בפציעות או הפרעות של מערכת השרירים והשלד.

הסרטונים, הפוסטים, הנושאים, הנושאים והתובנות שלנו מכסים עניינים קליניים, נושאים ונושאים הקשורים ותומכים במישרין או בעקיפין בהיקף העיסוק הקליני שלנו.*

משרדנו ניסה באופן סביר לספק ציטוטים תומכים וזיהה את המחקר או המחקרים הרלוונטיים התומכים בפוסטים שלנו. אנו מספקים עותקים של מחקרי מחקר תומכים הזמינים למועצות הרגולטוריות ולציבור על פי בקשה.

אנו מבינים כי אנו מכסים עניינים הדורשים הסבר נוסף כיצד זה עשוי לסייע בתכנית טיפול מסוימת או בפרוטוקול טיפולי; לכן, כדי לדון בהמשך בנושא לעיל, אנא אל תהסס לשאול ד"ר אלכס חימנז, די.סי, או צור איתנו קשר בכתובת 915-850-0900.

אנחנו כאן כדי לעזור לך ולמשפחתך.

ברכות

ד"ר אלכס חימנז זֶרֶם יָשָׁר, MSACP, RN*, CCST, IFMCP*, CIFM*, ATN*

דוא"ל: coach@elpasofunctionalmedicine.com

מורשה כדוקטור לכירופרקטיקה (DC) ב טקסס & ניו מקסיקו*
מס' רישיון טקסס DC TX5807, ניו מקסיקו DC # רישיון NM-DC2182

מורשה כאחות מוסמכת (RN*) in פלורידה
פלורידה רישיון RN רישיון # RN9617241 (מס' שליטה 3558029)
סטטוס קומפקטי: רישיון רב מדינות: מורשה להתאמן ב 40 מדינות*

ד"ר אלכס חימנז DC, MSACP, RN* CIFM*, IFMCP*, ATN*, CCST
כרטיס הביקור הדיגיטלי שלי